Efecto de Inmersiones en Calcio Sobre Peteca en Limones Amarillos y Plateados, Cosechados Después de una Lluvia y Almacenados en Refrigeración (página 2)

MATERIALES Y MÉTODOS

Frutos de limonero cv. Génova, obtenidos del
huerto "El Canelo", ubicado en la localidad de Mallarauco
(33º45’ lat. Sur; 71º15’ long. Oeste),
Región Metropolitana, Chile, se cosecharon con color amarillo y
plateado, en  tres fechas consecutivas: 3, 6 y 9 días
después de la primera  lluvia de la temporada, donde
precipitaron 80 mm en 48 h.  La situación de cada una
de estas fechas se analizó en forma separada.

Los limones se cosecharon al azar, con un calibre que
fluctuó entre 125 y 140. La fruta se curó en el
huerto durante dos días, y posteriormente se
trasladó al Laboratorio de
Poscosecha de la Facultad de Agronomía de la Pontificia
Universidad
Católica de Valparaíso, donde se sometieron a una
inmersión por 10 min en soluciones
acuosas de Ca. Tanto los limones amarillos como los plateados se
dividieron en tres grupos, a cada
uno se le aplicó una solución de: nitrato de Ca en
una concentración de 0,8%, cloruro de Ca al 0,5% y al 1%
de producto
comercial (Basfoliar Ca SL®, cuyo ingrediente activo es Ca en
una concentración de 170 g L-1).  El
tratamiento testigo correspondió a la inmersión de
los frutos en agua.

Los limones tratados se
almacenaron a 7 ± 1ºC con 95% de humedad relativa,
por 0, 15, 30 y 45 días, evaluándose la presencia
de peteca (expresado como porcentaje de frutos con el daño),
en 15 limones por tratamiento con cuatro repeticiones cada
uno.

El contenido de calcio total en la cáscara, se
analizó a los 7, 15 y 45 días de almacenaje a la
misma temperatura,
para dar tiempo a la
absorción del producto. Esta última variable se
analizó por digestión ácida (Kalra, 1998),
con un espectroscopio de absorción atómica (GBC
Modelo 903,
Melbourne, Australia) y se expresó en porcentaje de peso
seco.

Además, se efectuó un análisis histológico de los frutos
que manifestaron peteca. Para ello, muestras de 2 mm2
de cáscara con daño, se fijaron con una mezcla de
formalina al 37%, alcohol
etílico al 95% y ácido glacial acético, y se
sometieron a un proceso de
deshidratación con soluciones alcohólicas y
posterior inclusión en parafina sólida.  Las
muestras obtenidas se tiñeron con safranina al 1% y verde
luz 0,2%,
analizándose por microscopía óptica,
con aumentos de 2,5X y 10 X (Nikon, Modelo AFX-35, Tokio,
Japón)
(Undurraga et al., 2002).

Para probar normalidad de los datos obtenidos
se utilizó la prueba de Kolmogorov-Smirnov (Ostle, 1979).
Para el análisis de la incidencia de peteca se
utilizó un análisis de varianza para experimentos
unifactoriales. En caso de existir diferencias entre los
tratamientos, éstas se determinaron mediante la prueba de
intervalos múltiples de Duncan (p ≤ 0,05).

Los porcentajes de Ca determinados se compararon sin
realizar análisis estadísticos debido al bajo
número de muestras disponibles para ello, por lo que
sólo corresponden a tendencias.

RESULTADOS Y
DISCUSIÓN

Al comparar los limones plateados y amarillos en cada
fecha de cosecha por separado, se observó que siempre los
limones amarillos presentaron mayor incidencia de peteca que los
plateados (Cuadro 1), demostrando con ello que los frutos de
menor madurez presentan menor sensibilidad a este desorden, lo
que concuerda con lo observado por Palma et al. (1998) y
Undurraga et al. (2002).

Cuadro 1. Efecto de los días de
cosecha después de una lluvia sobre el porcentaje de
limones plateados y amarillos cv. Génova, afectados por
peteca.
Table 1. Effect of harvest days after rain on peteca rind pitting
percentage in yellow and green skin lemons cv. Genova.

Es posible que los limones plateados, al momento de la
cosecha, al estar más distantes de la etapa de
senescencia, tengan sus paredes con mayor firmeza que un
limón amarillo, que puede haber comenzado los procesos de
degradación propios de la madurez de la fruta, lo que
explicaría la incidencia de la peteca. Según Silva
(1991), el Ca juega un rol importante en el proceso de
senescencia vegetal, proceso que ocurre por una ruptura de la
estructura
celular. Duarte y Guardiola (1995) agregan que bajos niveles de
Ca en la pared reduce su resistencia a la
degradación enzimática, lo que conlleva a una
desorganización de las paredes celulares y colapso del
tejido. Por otra parte, la alta proliferación de oxalato
de calcio es uno de los puntos más concurrentes en la
descripción de este desorden (Palma et
al., 1998), habiéndose observado que niveles de mayor
acidez tienden a mantener solubles al ión oxalato y al
ión calcio por separado, reduciendo así la
formación de los cristales de oxalato de calcio (Libert y
Franceschi, 1987; Ilarslan et al., 1997). Esto
podría ser una de las causas por las cuales los limones
plateados presentan menos manifestación de peteca que los
limones amarillos.

De este trabajo se
puede inferir, además, que existe un menor número
de limones que manifiesten el daño a medida que la cosecha
se realiza varios días después de la lluvia. Esto
coincidiría con lo señalado por Razeto (1987;
2001), en el sentido que el desorden se induciría por
efecto de la lluvia sobre la fruta, e iría disminuyendo en
la medida que transcurre más tiempo entre la lluvia y la
cosecha.

Comparando los limones plateados y amarillos en cada
fecha de cosecha y tiempo de almacenaje por separado (Cuadro 2),
se observó que, en general, no existe efecto significativo
de la aplicación de las distintas soluciones de calcio
sobre la presencia de peteca. Sin embargo, en el segundo
período de almacenaje (día 15), en los limones
amarillos cosechados tres días después de la
lluvia, existió una diferencia significativa entre los
limones tratados con solución de calcio al 1% de producto
comercial que no presentaron peteca y el  testigo, que a esa
fecha presentaba  casi el 27% de los limones
afectados.

Cuadro 2. Porcentaje de peteca en limons
cv. Génova sometidos a inmersión en distintas
soluciones de calcio y almacenados a 7ºC por 0,15, 30 y 45
días.
Table 2. Percentage of peteca rind pitting in lemon cv. Genova
dipped in different calcium solution and stored at 7ºC for
0, 15, 30 and 45 days.

Sin embargo, este efecto no perduró en el tiempo,
y finalmente, al día 45, no hubo diferencias entre los
tratamientos. No obstante lo anterior, se puede observar que el
tratamiento con solución de calcio al 1% de producto
comercial presentó el menor número de limones
afectados al día 45, aunque al nivel de significancia que
se trabajó en este ensayo no
resultó significativo. Es posible que la distribución del Ca dentro del fruto tenga
que ver con la respuesta errática que muestra el
desarrollo de
la peteca (Retamales et al., 2000).

La falta de claridad del efecto del Ca podría
deberse también, a que al ser un desorden
fisiológico que comienza en precosecha, las aplicaciones
de poscosecha serían tardías para detener el
desarrollo de la peteca, la cual generalmente comienza en el
albedo y posteriormente afecta al flavedo, momento en que el
daño se hace visible en la superficie de la corteza del
fruto (Khalidy et al., 1969).

Otra causa para la falta de efecto de los tratamientos
podría ser que el tiempo de inmersión no haya sido
suficiente para lograr una absorción efectiva, toda vez
que la epidermis del limón presenta un alto contenido de
sustancias oleosas hidrofóbicas como son los aceites
esenciales (Seymour et al., 1993).

Del Cuadro 2 también se podría inferir que
a medida que transcurre más tiempo entre la cosecha y la
lluvia, es menor la incidencia de peteca, por lo cual éste
sería un elemento que podría estar determinando la
expresión de este desorden fisiológico, que aparece
relacionado con condiciones de baja temperatura y tal vez elevada
humedad del aire durante el
período de maduración del fruto (Razeto, 1987,
2001). Se puede visualizar además, que al igual que en el
Cuadro 1, los limones plateados manifiestan un menor desarrollo
de este desorden.

El análisis del porcentaje de Ca en la
cáscara del fruto (Cuadro 3) no sigue un patrón
definido, no pudiendo asociarse con el desarrollo de la
peteca.

Cuadro 3. Porcentaje de calcio en la
cáscara de limones cv. Génova cosechados 3, 6 y 9
días, después de una lluvia.
Table 3. Percentage of calcium in the rind of lemons cv. Genova
harvested at 3, 6, 9 days after rain.

El contenido de Ca en los frutos testigos, tendió
a aumentar principalmente en los limones amarillos, a medida que
las fechas de cosecha se distancian  de la lluvia. Esto
podría ratificar lo señalado por Hanson (1995),
quien indica que la pérdida de agua en los frutos tiende a
generar mayores concentraciones de calcio en los tejidos.

Esto pudo haber ocurrido en este ensayo, donde la
cáscara de los frutos testigos cosechados cerca de la
lluvia tuvo un mayor nivel de humedad, lo que diluyó el
calcio presente. Este comportamiento
no ocurrió en los otros tratamientos, por cuanto ellos
recibieron aportes de Ca.

Los limones plateados se vieron poco afectados por la
peteca (Cuadro 1). Al comparar el contenido de Ca de la corteza
(Cuadro 3), se observó que en la mayoría de los
casos, sobretodo en la segunda y tercera cosecha, los limones
plateados tenían un menor contenido que los amarillos.
Estos resultados concuerdan con otros reportados por la literatura (Undurraga et
al., 2002).  Storey y Treeby (2002) encontraron que el
nivel de Ca en la corteza de limones cv. Lisbon, fue
significativamente más alto en las zonas del fruto
afectadas por peteca que en regiones no afectadas. Esto
podría ser la explicación de por qué los
frutos amarillos tienen más propensión a este
desorden. Sin embargo, los mismos autores señalan que no
queda claro si el desarrollo de la peteca en el tejido
podría ser la causa del incremento del Ca, o bien, que un
aumento de este elemento sea la causa del desorden.

En el caso de los limones plateados, se puede observar
que los frutos más afectados por peteca fueron los
provenientes de la primera cosecha tratados con CaCl2
1% PC (Cuadro 2), a los 15, 30 y 45 días de almacenaje. El
porcentaje de Ca de la cáscara de los limones plateados de
este mismo tratamiento alcanza, en promedio, su valor
más alto en la segunda cosecha, donde no se observó
peteca, y los valores
más bajos en frutos cosechados tres y nueve días
después de la lluvia, a los 45 días de almacenaje,
donde los valores de
porcentaje de Ca fueron 0,63 y 0,67, respectivamente.  Es
por esto que no es posible asociar claramente el nivel de Ca en
la corteza con el desarrollo de peteca, toda vez que en el caso
del CaCl2 1% PC, el valor más bajo de Ca en la
corteza lo poseen limones que no presentaron peteca en la segunda
cosecha.

Análisis histológico

En la Figura 1a se aprecia que en el tejido afectado con
peteca las glándulas de aceite
aparecen absolutamente destruidas y lignificadas.  El
epicarpio también se encuentra fuertemente lignificado al
igual que las células
del mesocarpio. Las células que se encuentran entre ambos
tejidos están absolutamente normales y son de formas muy
regulares. No hay presencia de cristales d oxalato de Ca. En
el tejido sano en tanto (Figura 1b), la glándula aparece
intacta y las células presentan escasos síntomas de
lignificación.

Figura 1 Corte histológico en
cáscara de limones amarillos cv. Génova. Las
flechas muestran: a) Glándula de aceite en tejido afectado
por peteca; b) Glándula de aceite en tejido sano (2,5X –
Tinción: safranina al 1% y fast green al 0,2%).
Figure 1. Histological view of rind yellow lemons cv. Genova. The
arrows show: a) Oil gland in rind affected with peteca rind
pitting; b) Oil gland in normal tissue (2.5X – Dye: safranin 1% y
fast green 0.2%).

En general, los tres tratamientos con soluciones
cálcicas en limones amarillos mostraron una
lignificación y destrucción de células del
epicarpio o del flavedo y la formación de cristales de
oxalato de Ca, principalmente drusas asociadas especialmente al
sistema conductor
floemático próximo al endocarpio, además las
células del flavedo se encuentran invadidas de cristales
romboidales y cilíndricos (Figura 2). Los limones
plateados en tanto, también presentaron un grado de
lignificación de las células vecinas a las
glándulas de aceite y del epicarpio, sin embargo, los
cristales de oxalato de Ca se encontraron repartidos en el
mesocarpio (Figura 3).

Figura 2. Cristales de oxalatos de calcio
(ver flecha) en limones amarillos tratados con nitrato de calcio
0,8% (10X – Tinción: safranina al 1%).
Figure 2. Calcium oxalate crystals (see arrow) in yellow lemons
treated with calcium nitrate 0.8% (10X – Dye: safranin
1%).

Figura 3. Células sanas ubicadas
entre el mesocarpio y el epicarpio con escasa presencia de
oxalatos. (2,5X – Tinción: safranina al 1% y fast green al
0,2%).
Figure 3. Non damaged cells between mesocarp and epicarp, with
few oxalates crystals (2.5 X – Dye: safranin 1% y fast green
0.2%).

En limones amarillos, las glándulas de aceite
están destruidas y rodeadas de tejido lignificado, lo que
es característico de presencia de peteca. En limones
plateados se muestra que también las glándulas de
aceite están destruidas, sin embargo, el grado de
desorganización celular y de lignificación fue
menor y por ello la manifestación de peteca también
lo fue (Figuras 4, 5 y 6).

Figura 4. Glándulas afectadas por
peteca (flecha entera) y lignificación (flecha punteada)
en limones tratados con CaCl2 1% PC. a) Limón
amarillo (10 X); b) Limón plateado (2,5X – Tinción:
safranina al 1% y fast green al 0,2%).
Figure 4. Oil gland affected with peteca rind pitting (entire
arrow) and lignin (dotted arrow) in lemons treated with
CaCl2 1% PC. a) Yellow rind lemon (10 X); b) Green
rind lemon (2.5 X – Dye: safranin 1% y fast green
0.2%).

Figura 5. Glándulas afectadas por
peteca (flecha entera) y lignificación (flecha punteada)
en limones tratados con CaCl2  0,5% PC. a)
Limón amarillo (2,5X); b) Limón plateado (2,5X)
Tinción: safranina al 1% y fast green al 0,2%.
Figure 5. Oil gland affected with peteca rind pitting (entire
arrow) and lignin (dotted arrow) in lemons treated with
CaCl2 0,5% PC. a) Yellow rind lemon (2.5 X); b) Green
rind lemon (2.5 X) Dye: safranin 1% y fast green 0.2%.

 Figura 6.
Glándulas afectadas por peteca (flecha entera) y
lignificación (flecha punteada) en limones tratados con
nitrato de calcio 0,8%. a) Limón amarillo (2,5 X); b)
Limón plateado (2,5X) Tinción: safranina al 1% y
fast green al 0,2%.
Figure 6. Oil gland affected with peteca rind pitting (entire
arrow) and lignin (dotted arrow) in lemons treated with calcium
nitrate 0.8%. a) Yellow rind lemon (2.5 X); b) Green rind lemon
(2.5 X Dye: safranin 1% y fast green 0.2%).

Los cristales de oxalato de Ca son compuestos que la
planta elabora en forma natural para poder
metabolizar elementos nocivos para ella como el ácido
oxálico (Carvalhâo, 1997).  La formación
de estos cristales utilizando Ca es la manera más eficaz
de hacerlo, debido a que es un proceso físico que no
requiere gasto de energía (Khalidy et al., 1969).
Storey y Treeby (2002) no pudieron demostrar evidencia directa de
que la frecuencia de cristales de oxalato de Ca fuera un factor
causal del desorden peteca. Sin embargo, bajo estrés,
cristales tipo rafídios aparecieron en células del
flavedo en limones (Underhill et al., 1998), siendo
similar a lo encontrado en el presente trabajo.

En el caso del "bitter pit" en manzanas, el desorden se
produce cuando la cantidad de Ca disuelto no es suficiente para
neutralizar los ácidos,
por lo que requiere obtenerlo a partir del que se encuentra en
membranas y paredes celulares, con la consecuente
desorganización y posterior ruptura celular (Steenkamp,
1983, citado por Carvalhâo, 1997). Esto puede ser una
situación similar para el caso de la peteca, en que el Ca
de membranas y paredes contribuyan a neutralizar el ácido
oxálico en las células generando el aumento de
estos cristales de oxalato de Ca.

Es importante destacar que en ningún tratamiento
del presente trabajo, incluyendo el testigo, se encontró
lignificación en las células del albedo como
sintomatología de peteca. Toda la lignificación se
observó a nivel de glándulas de aceite y paredes
epidérmicas. En la zona del albedo, en lugar de producirse
la lignificación típica de una peteca se formaron
grandes cantidades de cristales de oxalato de Ca.

CONCLUSIONES

Limones plateados cv. Génova cosechados a los 3,
6 y 9 días después de una lluvia son menos
susceptibles a manifestar peteca que los limones
amarillos.

Los tratamientos con solución de calcio no
impiden la generación de peteca en limones amarillos cv.
Génova al ser aplicados por inmersión en frutos
cosechados a los 3 y 6 días después de una
lluvia.

En esta investigación no fue posible determinar una
relación entre la concentración de calcio en la
cáscara de los limones y el desarrollo de
peteca.

En los análisis histológicos de
cáscara de limones, se observó que los frutos
afectados por peteca mostraron sus glándulas oleosas
lignificadas, desorganizadas y colapsadas.

Se observó también que limones tratados
con soluciones de calcio presentan desorganización celular
y formación de cristales de oxalato de calcio en forma de
drusas; esta desorganización es mayor en los limones
amarillos.

RECONOCIMIENTO

Esta investigación fue financiada por el Proyecto FONDECYT
1020 546.

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Pedro Undurraga M.1, José A. Olaeta
C.1, Jorge Retamales A.2 y Alejandra Brito
P.1


1
Pontificia Universidad Católica de
Valparaíso, Facultad de Agronomía, Casilla 4-D,
Quillota, Chile.
2 Universidad de Talca, Facultad de Ciencias
Agrarias, Casilla 747, Talca, Chile.